多肽合成是生物化学中用于构建蛋白质和多肽链的重要技术，其核心原理是通过化学方法将氨基酸按特定顺序连接成肽键。以下是多肽合成的基本步骤及原理：
一、基本原理
多肽合成通过 缩合反应实现，具体过程包括：
氨基酸活化：
将氨基酸的α-氨基用保护基团（如Boc、FMOC）保护，羧基活化生成活泼中间体（如酸酐或酰氯）；
缩合反应：
活化后的氨基酸之间通过脱去一分子水形成肽键，反应可在线性或固相载体上进行；
纯化与裂解：
通过洗涤、去保护、中和等步骤去除未反应物质，最后将肽链从树脂上裂解并纯化。
二、固相合成法（SPPS）
这是目前最常用的多肽合成方法，步骤如下：
树脂选择与氨基酸固定 选择不溶性高分子树脂（如交联聚苯乙烯、聚酰胺等），将目标多肽的C端氨基酸羧基通过共价键连接在树脂上，氨基作为合成起点；
保护基团引入与脱除
- α-氨基用Boc或FMOC保护，羧基用酸酐（如DCC）或强缩合剂（如碳二亚胺）活化；
- 反应后通过洗涤去除未反应物，再通过碱液或酸液脱除保护基团；
成肽反应与链延伸
活化后的氨基酸依次缩合，重复“缩合→洗涤→去保护→中和→洗涤”循环，逐步延长肽链；
纯化与裂解
合成完成后，通过柱色谱或结晶纯化肽链，并从树脂上裂解下来。
三、液相合成法（传统方法）
逐步合成
从C端氨基酸开始，依次通过DCC、混合炭酐等试剂连接氨基酸，每步反应后纯化中间产物；
片段组合
对于长链多肽，先合成短片段，再通过肽键连接技术组装成目标多肽；
纯化
液相合成需频繁纯化中间产物，操作复杂且耗时。
四、技术优势与改进
固相合成法相比液相法具有以下优势：
自动化程度高： 反应可连续进行，减少人工操作； 产物纯度好
可扩展性强：适合合成5-50aa短链多肽，长链多肽需结合片段合成技术。
五、应用与挑战
多肽合成技术广泛应用于药物开发、生物材料等领域。当前研究正朝着自动化设备优化、新型保护基团开发及绿色合成工艺方向发展。
